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检测实验室柱子相关实用技巧全攻略

一、柱子相关技巧

（一）柱子类型

加压柱：

压力可由压缩空气、双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）提供。能增加淋洗剂流动速度，减少产品收集时间，但会减低柱子塔板数。压力不可过大，否则溶剂走得太快会减低分离效果，在容易分解的样品分离中适用。

常压柱：

在其他条件相同的时候，效率最高，但时间也最长，例如天然化合物的分离，一个柱子可能需要几个月的时间。

减压柱：

能够减少硅胶使用量，能节省一半甚至更多。不过大量空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时柱子外面有水汽凝结），有些易分解的东西可能得不到，并且需要同时使用水泵抽气（噪音大且时间长）。

（二）柱子尺寸

又粗又长的柱子较好。柱子长，相应塔板数就高；柱子粗，上样后样品原点小（样品层比较薄），可减小分离难度。常见的柱子径高比一般为1:5 - 10，硅胶量是样品量的30 - 40倍。如果所需组分和杂质比较容易分开（所需组分Rf在0.2 - 0.4，杂质相差0.1以上），可以少用硅胶，用小柱子；如果相差不到0.1，就要加大柱子（可增加柱子直径或者减小淋洗剂极性等）。

（三）柱子上样前处理

可以湿柱，也可以干柱。但在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能使产品分解，对于分离敏感物质时需特别注意。并且由于分离的东西可能比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。

二、上样技巧

（一）湿法上样

湿法上样比较省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等溶剂。有些样品在上柱前是粘乎乎的也没关系，不过有的样品上样后在硅胶上会析出（一般是大量样品才会出现这种情况，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体），这种情况可以先重结晶，得到大部分产品后再柱分，如果不能重结晶也可直接过柱，随着淋洗剂流动样品会溶解。

（二）干法上样

当样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（如DMF、DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾）时，就必须用干法上样。

三、溶剂相关技巧

（一）溶剂选择

一般选择便宜、安全、环保的溶剂，大多选用石油醚、乙酸乙酯。正己烷虽然也有用，但价格较贵，若非特别需要尽量不用；乙醚也可使用，但使用时要注意保持清醒，防止溶剂流干；二氯甲烷和硅胶的吸附是放热过程，夏天柱子里易产生气泡，天气冷时会好一些。由于某些原因，淋洗剂多是大包装的工业品，其纯度较低，比较严格的柱分时需要对溶剂重蒸。另外，溶剂过柱子后**回收使用，一方面环保，另一方面节省经费，但需要消耗一定人工。

（二）溶剂在过柱过程中的注意事项

在过柱同时进行减压旋蒸时，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度不同会导致极性变化（一般会使极性变大），在梯度淋洗时比较合适。过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压回收会减少这种现象，如果杂质和要过的样品有反应就会造成不良影响。

四、操作技巧

（一）装柱

柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，可采用四氟节门的。干法和湿法装柱只要能把柱子装实就行，装完的柱子要适度紧密（太密淋洗剂走得太慢）且均匀（不然样品会从一侧斜着下来），如果装的柱子总是有气泡就需要多练习，柱子开裂（不管竖的还是横的）会影响分离效果甚至作废。

（二）加样

用少量溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。

（三）淋洗剂选择

一般要使所需点在Rf0.2 - 0.3左右的比较好。

（四）样品收集

用硅胶作固定相过柱子的原理是吸附与解吸的平衡，如果样品与硅胶的吸附比较强就不容易流出。

（五）最后的处理

柱分后的产品，由于使用了大量溶剂，其中杂质会累积到产品中，如果想送分析，**用少量溶剂洗涤一下，因为大部分杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。